基因工程的基本操作程序主要包括：第一步是目的基因的获取，第二步是基因表达载体的构建，第三步是将目的基因导人受体细胞，第四步是目的基因的检测与鉴定．
（1）第三步中，将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；显微注射法是将目的基因导入动物细胞最有效的方法；当受体细胞是微生物细胞时（如大肠杆菌），常采用感受态细胞法，即首先用Ca2+（或CaCl2）处理微生物细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞．
（2）第四步中，将目的基因导入受体细胞后，检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因常采用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否转录出相应的mRNA，常采用分子杂交技术；DNA分子杂交技术还可用于疾病诊断、监测环境污染、身份鉴定等．
故答案为：
Ⅰ．基因表达载体的构建
（1）花粉管通道法 显微注射法 Ca2+（或CaCl2） 感受态细胞
（2）DNA分子杂交技术 DNA分子杂交技术还可用于疾病诊断、监测环境污染、身份鉴定等
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